均相技术在mRNA疫苗及药物研发中的应用

mRNA疫苗是将编码疾病特异性抗原的mRNA引入体内，利用宿主细胞的蛋白质合成机制产生抗原，从而触发免疫应答。通常可根据不同疾病构建特异性抗原的mRNA序列，由新型脂质纳米载体颗粒包裹运送至细胞内，再利用人体核糖体翻译mRNA序列产生疾病的抗原蛋白，分泌后被自身免疫系统识别产生免疫反应，从而达到预防疾病作用面对新冠病毒疫情的持续，其工作原理如下图：

随着COVID-19的全球流行，各国倾力研究用于阻遏新冠流行的疫苗。mRNA疫苗在作为一种新型疫苗，在新冠疫情来临时发挥了排头兵的作用。随着技术的发展，近些年来，mRNA技术也在肿瘤治疗领域发挥出了非常不错的治疗效果。攻克实体瘤，是CAR-T细胞疗法未来发展的重要方向，而mRNA技术就是强有力的助力之一

本文提供了均相技术在mRNA疫苗研发中一些解决方案，包括有测dsRNA残留、测DNA残留以及测中和抗体判断药效等。

一、检测dsRNA残留

该试剂盒基于HTRF®技术（均相时间分辨荧光）用于细胞裂解液中病毒双链RNA(dsRNA)的简单快速定量，并提供了定量PCR(qPCR)的简单替代方法。

HTRF dsRNA检测原理

使用Eu（荧光能量供体）标记的抗dsRNA抗体和d2（受体）标记的抗dsRNA抗体，采用夹心法检测dsRNA。荧光能量供体和受体因dsRNA相互接近时，用光源（激光或闪光灯）激发供体，触发荧光共振能量转移(FRET)，进而在特定波长(665nm)发出荧光信号。信号强度与dsRNA的浓度成正比。

HTRF技术优势

①操作简单：空板加样，无需洗板和包被；

②节省样本：仅需10μl；

③灵敏度高，实验背景低；

④通量高：适合96/384/1536孔板。

操作流程

两步法：首先空板中加入10μl样本，再加入检测试剂各5μl，孵育过夜即可使用酶标仪读板。

HTRF dsRNA检测试剂盒

货号

产品名称

规格

64RNAPEG

Viral dsRNA detection Kit

500 tests

64RNAPEH

10,000 tests

二、测中和抗体判断药效

1、Luminescence Assays

萤火虫荧光素酶（Luciferase）在含有镁离子的情况下，可催化荧光素与ATP反应生成荧光素-AMP（中间体）和焦磷酸（PPi）。然后催化中间体氧化生成AMP、CO2和激发态的氧化荧光素。激发态的氧化荧光素在返回基态时发射出光。Luciferase的发光反应不需要额外的激发光，只要Luciferase和底物接触就能产生荧光，发出的光子可以被光敏感元件测到，避免了因背景物质被激发而产生的背景荧光干扰。

将报告基因嵌入病毒，病毒侵染宿主细胞后可以检测到发光信号，加入中和抗体与病毒结合可阻断病毒侵入宿主细胞，发光强度就会减弱，以此判断中和抗体药效。

PerkinElmer Luminescence产品优势

①操作简单，灵敏度高；

②常温2-8℃运输，4℃储存；

③不含DTT。

操作流程

复溶buffer加入冻干底物中充分混匀5min，等量加入细胞中孵育10-20min即可读板。灵敏度和半衰期结果如下图。

（中检院有关新冠中和抗体活性评价的研究，就是这一款Britelite plus试剂盒）

britelite plus

货号

产品名称

规格

6066766

britelite plus

10 mL

6066761

100 mL

6066769

1,000 mL

新冠病毒SARS-CoV-2 S1/ACE2抗体研发中HTRF和AlphaLISA技术有相关成品检测试剂盒均可提供。

2、HTRF®SARS-CoV-2 S1/ACE2 Assay

HTRF ®S1/ACE2结合试剂盒用于测量S1和ACE2之间的相互作用。利用HTRF（均相时间分辨荧光）技术，该检测方法能够实现：高通量、简单、快速地筛选化合物和抑制剂。

ACE2用Eu（HTRF供体）标记，S1用d2(HTRF受体)标记。当供体和受体因S1和ACE2结合而接近时，供体的激发触发向受体的荧光共振能量转移(FRET)，受体在665nm处发射信号。这种特定的信号与S1/ACE2相互作用的程度成正比。因此，化合物或抗体阻断S1/ACE2的相互作用会导致HTRF信号的下降。